Bacterial artificial chromosome

A bacterial artificial chromosome (BAC) is a DNA construct, based on a functional fertility plasmid (or F-plasmid), used for transforming and cloning in bacteria, usually E. coli. F-plasmids play a crucial role because they contain partition genes that promote the even distribution of plasmids after bacterial cell division. The bacterial artificial chromosome's usual insert size is 150-350 kbp, but can be greater than 700 kbp. A similar cloning vector called a PAC has also been produced from the bacterial P1-plasmid.

BACs are often used to sequence the genome of organisms in genome projects, for example the Human Genome Project. A short piece of the organism's DNA is amplified as an insert in BACs, and then sequenced. Finally, the sequenced parts are rearranged in silico, resulting in the genomic sequence of the organism.

Common gene components

oriS, repE - F

for plasmid replication and regulation of copy number.

parA and parB

for partitioning F plasmid DNA to daughter cells during division and ensures stable maintenance of the BAC.

A selectable markers

for antibiotic resistance, some BACs also have lacZ at the cloning site for blue/white selection.

T7 & Sp6

phage promoters for transcription of inserted genes.

فيزيولوژي سيستم تعادلی

سیستم تعادلی گوش بسیار پيچيده است. این سیستم شامل سه كانال نيم دايره اي و دو ارگان اتوليتيِ اوتریکل و ساکول است .عملكرد اصلي اين سيستم برقراري تعادل است. مجموعه سیستم تعادلی گوش، رفلكسهايي را تحت كنترل دارند كه براي تعادل و كاركردهاي اصلي  سیستم تعادلی گوش حياتي هستند اين رفلكسها عبارتند از :

(1) رفلکس حفظ پایداری سر

(2) رفلكس كنترل ايستائي

(3) رفلكس چشمی- تعادلیكه كار آن پايدار نمودن تصوير بر روي شبكيه است . این رفلکس بيشتر از همه بررسي شده است. كه در جاي خود مورد بحث گذاشته خواهد شد  

بايستي مدنظر داشت كه سیستم تعادلی گوش يكي از سه سيستم كلي دخيل در ايجاد تعادل است. سایر سیستم های دخیل در تعادل عبارتند از: سیستم درک حس عمقی محیطی و سيستم بينايي است

رفلكسهاي سیستم تعادلی اساس حفظ تعادل هستند و پايه هاي رفلكسهاي سیستم تعادلی عبارتند از: سلولهاي موئي، نورون آوران دو قطبي، نورون بينايي و درنهايت نوروني كه واكنش را اعمال مي كند كه همان نورون عمل کننده مي باشد

در بررسي و بيان فيزيولوژي ابتدا به بررسي اين رفلكسها و نيز فيزيولوژي عملكرد كانالهاي نيم دايره اي و اتوليت ارگانها پرداخته و سپس به بررسي سيستم مرکزی سیستم تعادلی مي پردازيم. ابتدا به بررسي محيط لابيرنت مي پردازيم. كانالهاي نيم دايره اي حركات چرخشي سر را متوجه مي شوند ( حركات زاویه دار ) در حاليكه ارگانهاي اتوليتي حركات خطي را درك كرده و حساس به جاذبه هستند. عمده عملكرد اوتریکل واكنش به وضعيت سر نسبت به جاذبه است

برای مشاهده ادامه روی گرینه ادامه مطلب در زیر کلیک کنید

پنی سیلین ها و سفالوسپورین ها

پنی سیلین ها

فلمینگ در سال 1992 ، مشاهده ای از خود گزارش داد که طی آن کلنی های استافیلوکوک در روی بشقابی که به قارچ پنیسیلیوم آلوده  بوده ، لیز شده اند . تلاش او برای استخراج ماده باکتریولیتیک با شکست مواجه شد . ام درسال 1940 ، چین ، فلور و همکارانش موفق شدند که از کشت های penicillium  notatum  مقادیر قابل توجهی از اولین پنی سیلین رل تولید کنند . تا سال 1949 مقادیر فراوانی از پنی سیلین G برای مصارف بالینی در دسترس قرار گرفت .حساسیت پنی سیلین G به اثرات تخریبی بتا- لاکتاماز ( پنی سیلیناز ) و ناتوانی نسبی آن در برابر اکثر باکتریهای گرم منفی ، دو محدودیت اصلی این دارو بود . برای حل این مشکلات تحتیقاتی توسط چین ، رولینسون و باچلر سازمان دهی شد که در سال 1957 منجر به جداسازی 6-aminopenicillanic  acid  به مقادیر انبوه گردید . این امر شروعی بود برای تکامل سری طویلی از پنی سیلین های نیمه سنتتیک . نتیجه این کار طراحی انتخابی داروهایی بود که به بتا- لاکتاماز  مقاوم بودند ، در PH اسیدی پایدار می مانند ، و هم بر ضد باکتری های گرم مثبت و هم بر ضد باکتری های گرم منفی فعال بودند .

پنی سیلین ها و سفالوسپورین ها گروه بزرگی از داروها هستند که در بسیاری از خصوصیات شیمیایی مکانیزم عمل ، اثرات فارماکولوژیک و بالینی و خصوصیات ایمونولوژیک با هم مشابهند . این داروها به علت داشتن انحصاری یک حلقه چهار عضوی لاکتام ، داروهای بتا لاکتام نامیده می شوند .

شیمی

تمام پنی سیلین ها ساختمان پایه مشترکی دارند که در شکل 43-1 (بالا ) نشان داده شده است . یک حلقه تیازولیدین (A) وجود دارد که به حلقه ی بتا – لاکتام (B) متصل شده است و یک گروه ثانویه آمینواسیدی (R-NH-)  را حمل می کند .رادیکالهای اسیدی   R)رک شکل 43-2 ) می توانند به گروه آمینی متصل شده و بر اثر آمیدازهای باکتریایی یا سایر آمیدازها از آن جدا شوند . همانطور که در شکل 43-1 نشان داده شده است ، ساختمان های پایه مشابهی که به حلقه ی بتالاکتام می پیوندند ، سبب ایجاد خانواده های سفالسپورین ، منوباکتام و کارباپنم Carbapenem  می شوند . تمامیت (Integrity) ساختمانی هسته 6-aminopenicillanic  acid   برای فعالیت بیولوژیکی ملکولها ضروری است . اگر حلقه بتالاکتام بر اثر آنزیمهای بتا –لاکتاماز باکتریایی ( پنی سیلیناز) شکافته شود ، مایه ای ایجاد می شود (Penicilloic ) که فعالیت ضد باکتریایی ندارد . اما این مایه شاخص های آنتی ژنیک پنی سیلین را حفظ می کند و وقتی به پروتئین های میزبان متصل شود به عنوان یک ساختمان حساس کننده عمل می کند و می تواند در صورتی که زنجیر های پپتیدی متصل شود به عنوان ماده آزمون پوستی (skin test) به کار رود . مواد تولیدی ناشی از هیدرولیز آلکالینی پنی سیلین ها نیز می توانند د حساس سازی (sensitization ) شرکت داشته باشد .

اتصال رادیکالهای (R) متفاوت به گروه آمینی 6-aminopenicillanic  acid   خصوصیات فارماکولوژیک ضروری هر یک از ملکولهای ایجاد شده را تعیین می کند . پنی سیلین های در دسترس در سال 1994 که از نظر بالینی اهمیت داشته اند ، به چند گروه تقسیم می شوند : (1) داروهای این گروه بالاترین فعالیت را علیه ارگنیزم های گرم مثبت دارند ، فعالیت های کم علیه باسیل های گرم منفی دارند و به هیدرولیزم ناشی از بتا – لاکتامازها حساس هستند . پنی سیلین G مثالی از این گروه است . (2) این گروه به بتا- لاکتاماز استافیلوکوک ها نسبتاً مقاوم هستند ولی فعالیت کمی علیه ارگانیزم های گرم مثبت دارند و علیه گرم منفی ها بی اثرند . نفسیلین nafcillin و متی سیلین جزء این گروهند (3) این گروه فعالیتی نسبتاً بالایی هم بر علیه ارگانیزم های گرم منفی و هم بر علیه ارگانیزم های گرم مثبت دارند ، اما بوسیله بتا – لاکتاماز تخریب می شوند . کار بنی سیلین و تیکار سیلین مثالهایی از این گروهند . (4) نسبتاً در برابر اسید معده پایدار هستند و مناسب تجویز خوراکی می باشند . مثلاً پنی سیلین V ، آمپی سیلین و کلوگزاسیلین . در شکل 43-2 برخی از نماینده های هر گروه با برخی از خصوصیات متمایز کننده آنها نشان داده شده  است .

اکثر پنی سیلین ها به صورت نمک های سدیم و پتاسیم اسیدهای آزاد در دسترس قرار دارند . پنی سیلین G پتاسیمی ، حاوی 7/1 میلی اکی والان در هر یک میلیون واحد ، K⁺ است)  (2/8 meq/g . نفسیلین حاوی 2/8 meq/g ، Na⁺ می باشد . اشکال قابل تزریق در عضله بوسیله نمک های پروکائین و نمک های بنزاتین فراهم شده اند .

نمک های پنی سیلین در فرم کریستالین خشک برای مدت طولانی پایدار می مانند . ( مثلاً برای سالها در c4 ) محلولهای فعالیت خود را بسرعت از دست می دهند (مثلاً 24 ساعت در c20 ) و باید برای مصرف، تازه تهیه شوند .

فعالیت ضد میکروبی داروهای بتا- لاکتام

مکانیزم عمل عوامل بتا- لاکتام مشابه یکدیگر است و از طریق آسیب دیواره سلولی اعمال می گردد . این مکانیزم ها در فصل 42 شرح داده شده اند . بطئر خلاصه مراحل آن این چنین است : (1) اتصال به پروتئین های اختصاصی ، پیوند یابنده به پنی سیلین ( PBP ها ) که به عنوان رسپتور دارو بر باکتری عمل می کنند . (2) مهار سنتز دیواره سلولی از طری ببلوک کردن ترانس پپتیداسیون پپتید و گلیکان و (3) فعال کردن آنزیم های اتولیتیک در دیواره سلولی ، که نتیجه ی آن ایجاد آسیب هایی است که منجر به مرگ باکتری می شود .

پن سیلین های مختلف فعالیت کمی مختلفی بر علیه برخی ارگانیزم ها دارند . در حالی که غلظت 0/002-0/5ug/ml از پنی سیلین G برای اکثریت باکتری های گرم مثبت حساس کشنده است ولی فعالیت نفسیلین و سایر پنی سیلین های مقاوم به بتا-لاکتاماز در برابر همین میکرو ارگانیزم ها 10تا 100 برابر کمتر است . حساسیت میکرو ارگانیزم ها تا حدودی به علت فونکسیونی از خانواده(genus)  آنها است و تا حدی نیز به علت خصوصیات خاص هر سویه (strain) است . تفاوت در حساسیت ارگانیزم های گرم منفی و گرم مثبت تا حدودی مربوط به تعداد و نوع رسپتورهای دارویی ؛ مقدار نسبی پپتیدوگلیکان موجود( درارگانیزم های گرم مثبت بسیار بیشتر است ) مقدار لیپیدها در دیواره سلولی ، و تفاوت های شیمیایی دیگر است که تعیین کننده پیوند ، نفوذ و مقاومت نسبت به لیز شدن یا پارگی است. مسیرهای گرم منفی به اندازه بسیاری از ارگانیزم های گرم مثبت به پنی سیلین G حساس است .

 فعالیت پنی سیلین G را از ابتدا برحسب واحد تعریف کرده اند . پنی سیلین G سدیمی کریستالین ، حاوی تقریباً 1600 واحد در میلی گرم است ( یک واحد =0/6ug = یک میلیون واحد پنی سیلن =6/0 گرم ) . اکثر پنی سیلین های نیمه سنتیک بجای واحد برحسب وزن تجویز می شوند .

از این آزمون به منظور شناسایی قابلیت میکرواگانیسمها جهت تولید آنزیم اوره آز استفاده می شود.این آزمون کمک زیادی به تشخیص پروتئوس ولگاریس و پروتئوس میرابیلیس می نماید.از طرف دیگر با استفاده از این آزمون می توان در اسرع وقت اعضای این جنس را از سایر باکتریها ی انتریک غیر تخمیر کننده لاکتوز متمایز نمود.

آنزیم اوره آز یک آنزیم هیدرولیتیک بوده که با اتصال به پیوند کربن– نیتروژن در ترکیبات آمیدی همانند اوره سبب گسستن این پیوند می گردد و محصولات نهایی همانند آمونیاک و CO2 را ایجاد می نماید.از محیط کشت اوره آز که ممکن است به حالت جامد یا مایع باشد جهت پی بردن به وجود آنزیم اوره آز در میکروارگانیسم ها استفاده می شود.در این محیط کشت از اوره به عنوان سوبسترای اصلی و از فنول رد به عنوان معرف PH استفاده می شود.این معرف در  PH خنثی به رنگ صورتی کم رنگ و در PH قلیایی به رنگ قرمز تیره است.پس از کشت در صورتی که  MO واجد آنزیم اوره آز باشد،اوره موجود در محیط را تجزیه کرده و به آمونیاک تبدیل می کند.در نتیجه تجمع آمونیاک،PH محیط افزایش یافته و قلیایی می شود.و معرف از صورتی به قرمز تیره تغییر رنگ نشان می دهد که نشان دهنده مثبت بودن واکنش است.

آزمون سيترات

اين آزمون به منظور شناسايي برخي از ميکرو ارگانيسمها که قادرند از سيترات به عنوان تنها منبع کربن استفاهده نمايند بکار ميرود.براي انجام اين آزمون از محيط افتراقي سيمون سيترات استفاده مي گردد.اين محيط واجد سيترات سديم به عنوان تنها منبع کربن محيط،املاح آمونيم به عنوان منبع ازت و معرف بروموتيمول بلو (BTB) مي باشد.اين معرف که در PH خنثي به رنگ سبز  و در PH  قليايي به رنگ آبي ديده مي شود.

باکتري مورد نظر را در محيط سيمون سيترات آگار تلقيح کرده،به مدت 48_24 ساعت در دماي 37 درجه انکوبه مي نمايند.باکتريهايي قادرند از سيتراتلستفاده کنند که در محيط کربوهيدرات تخميري ديگري وجود نداشته باشد.آنزم سيترات پرمه آز سيترات را به داخل سلول منتقل نموده و آن را در داخل سلول به اسيد اگزالواستيک و استات تبديل مي کند.سپس اسيد اگزالواستيک به اسيد پيروويک و CO2 تبديل مي شود.CO2 حاصلبا يون سديم و آب ترکيب شه و کربنات سديم توليد مي نمايد.که سبب قليايي شدن محيط و تغيير رنگ معرف  BTB از رنگ سبز به آبي ميشود.

میکروسکوپ

در بررسی و مطالعه  سلول ، یکی از مشکلات  زیست شناسان ، کوچکی فوق العاده سلول و اجزاء آن می باشد.برای از بین بردن این مشکل ، از وسیله ای به نام میکروسکوپ (Microscope) یا ریزبین ، استفاده می شود.

میکروسکوپ از نظر لغوی از دو بخش میکرو به معنی کوچک و سکوپ به معنی رؤیت (مشاهده) تشکیل شده است.

میکروسکوپ نوری ، اولین میکروسکوپی است که توسط بشر ، ساخته شد.

 مراحل تکمیل میکروسکوپ نوری : 1) میکروسکوپ لی وان هوک  کک   42 بار بزرگ می کند. 2) میکروسکوپ رودلف ویرخف تا 500 برابر اشیاء را بزرگ می کند. 3) میکروسکوپ  مولر دارای  قدرت بزرگنمایی 1000 برابر است.

به ميكروسكوپ نوري  میکروسکوپ مرکب نيز مي گويند چون بزرگنمایی میکروسکوپ ، مجموع بزرگنمایی دو عدسی آن می باشد که یکی عدسی شیئی (objective)  و دیگری عدسی چشمی (ocular) است. و به این علت زمینه روشن (Bright Field)   نيز مي گويند که نور از میان قسمتی شفاف عبور می کند و زمینه اطراف شئ مورد مطالعه را روشن می نماید. در این میکروسکوپ ، منبع نور دهنده ، نور مرئی است که معمولا از یک لامپ با تشعشع زیاد و یا یک آینه برای بازتاباندن نور به داخل میکروسکوپ ، استفاده می گردد.

هر میکروسکوپ از دو بخش مکانیکی و نوری تشکیل شده است.

1- بخش مکانیکی:در واقع قسمت هایی است که مستقیما در عبور و تشکیل تصویر نقش اصلی را به عهده ندارند و شامل کلیه بخش های نگاهدارنده، حرکت دهنده و ثابت کننده یک میکروسکوپ می باشند. مانند پایه ، دسته ، صفحه پلاتین ، شاریو ، صفحه گردان ، پیچ های تنظیم:(سریع و دقیق) ، گیره ها و لوله میکروسکوپ.

ـ پایه میکروسکوپ: به اشکال نعلی ، مدور، مکعب مستطیلی و مانند آن ساخته می شود.جنس پایه معمولا از فولاد سنگین انتخاب می گردد تا از هر گونه لغزشی جلوگیری شود.

ـ دسته میکروسکوپ: برای جابجایی میکروسکوپ به کار می رود و معمو لا داسی و هلالی شکل است.

ـ پیچ های تنظیم: بر روی دسته میکروسکوپ قرار دارند. شامل پیچ میزان سریع یا ماکرو متر و پیچ میزان دقیق یا میکرومتر می باشد.عمل آنها جابجا کردن لوله میکروسکوپ (در میکروسکوپ های قدیمی) در جهت بالا و پایین و بالعکس می باشد. در میکروسکوپ های جدید این پیچ ها معمو لا صفحه پلاتین را در جهت بالا به پایین و بالعکس جابجا می کنند.

ـ صفحه پلاتین: صفحه ای است فلزی یا کائوچویی که محل قرار دادن جسم مورد مطالعه می باشد.روی صفحه پلاتین سیستمی به نام شاریو(ارابه کش) پیش بینی شده است.شاریو دارای دو بخش تیغه ای برای نگهداری نمونه است و نیز پیچ هایی در زیر پلاتین قرار دارد که با چرخاندن آنها می توان نمونه را بر روی پلاتین، و یا مجموعه نمونه و پلاتین را به چپ و راست یا به جلو و عقب حرکت داد.

ـ سیستم ورنیه: در دو بعد عمود بر هم پلاتین، دو سیستم ورنیه ای پیش بینی شده است، که به کمک آنها می توان میزان جابجایی جسم در جهات مختلف و بازیابی منطقه ای خاص از جسم مورد مشاهده را انجام داد.

ـ صفحه گردان: قطعه فلزی است، تقریبا به شکل مخروط ناقص که در سطح پایین آن تعدادی سوراخ تعبیه شده است.به هر یک از این سوراخها، یک لوله عدسی شیئی پیچ می شود. صفحه گردان در بالا به لوله میکروسکوپ متصل می گردد.

ـ لوله میکروسکوپ: در قسمت بالای آن اکولر (لوله عدسی چشمی) و دربخش پایین آن صفحه گردان قرار دارد. در بیشتر موارد طول لوله میکروسکوپ 16 سانتیمتر یا 160 میلیمتر است.

2- بخش نوری: شامل سه بخش اساسی است:دستگاه روشنایی ـ ابژکتیف ـ اکولر

ـ دستگاه روشنایی: از دو بخش تشکیل شده است:

الف) منبع نور: به طور معمول لامپ کوچک 6 تا 10 ولت است که اغلب در زیر پایه میکروسکوپ قرار دارد.

ب) کوندانسور: کوندانسور از مجموعه ای از عدسی های محدب (کوژ) یا محدب الطرفین ساخته شده که عمل آنها همگرا کردن پرتو های نوری حاصل از منبع نور و تابانیدن آنها بر روی جسم است.

انواع کوندانسور

1-     کوندانسور آبه: از مجموعه دو عدسی محدب (محدب الطرفین) ساخته شده است و  انحرافات کروی و رنگی (نوری) را تصحیح نمی کند.اين كوندانسور در فاصله بين منبع روشنايي تا جسم و به طور معمول در زير صفحه پلاتين قرار دارد.

2-   کوندانسور آپلانتیک: این نوع کوندانسور دارای یک عدسی محدب بینابینی اضافی می باشد. کار این عدسی اضافی اصلاح انحرافات کروی است.با این کوندانسورها ، انحرافات رنگی اصلاح نمی شود و برای اصلاح آن بایستی از نور تک رنگ استفاده کرد.

انحرافات کروی: این گونه انحرافات ناشی از تحدب و کرویت عدسی ها می باشد. اگر یک دسته پرتوهای نوری موازی به یک سطح کروی(مثلا یک عدسی محدب) برخورد کند ، همه به یک میزان پراش نمی یابد. پرتو هایی که از مرکز می گذرند، بدون شکست پیش می روند. حال آنکه پرتوهایی که به محیط و کناره عدسی برخورد کنند پراش بیشتری دارند به این ترتیب هر چه شعاعهاي نورانی به مرکز سطح کروی نزدیکتر باشند، شکست کمتری دارند. و هر چه قدر از مرکز آن دور شوند، شکست بیشتری می یابند.پراش نابرابر همه پرتو های نورانی موازی را که به یک سطح کروی می رسند، انحرافات کروی نامند. کوندانسور های آپلانتیک با عدسی های محدب اضافی که دارند موجب همگرایی بیشتر پرتو ها(کوچک شدن منطقه کانون) و در نتیجه یکنواختی بیشتر شدت روشنایی روی جسم می شوند.

انحرافات رنگی: تفکیک طیف های سازنده هر نور مرکب در برخورد با یک عدسی و شکست متفاوت آنها را اصطلاحا انحرافات رنگی نامند.این انحرافات از وضوح تصویر می کاهد. برای اصلاح آن از نور تک رنگ که فقط دارای یک طول موج خاص می باشد، استفاده می شود. نور تک رنگ را می توان با استفاده از فیلترهای رنگی به دست آورد.

فیلتر ها(صافی های نور):فیلتر ها صفحات شیشه ای رنگین، تیره رنگ یا مشبکی هستند که از آنها برای ایجاد روشنایی یکنواخت ، پراکندگی نور و بالا بردن تضاد استفاده می شود. از آنجا که هر فیلتری طیف همرنگ خود را عبور می دهد و بر عکس از عبور طیف های مکمل رنگ خود جلوگیری می کند، با استفاده از فیلترهای رنگی می توان تک رنگ دلخواه و مناسب برای هر مشاهده  میکروسکوپی را فراهم ساخت.هنگام مشاهده میکروسکوپی با میکروسکوپ های فاز متضاد و زمینه تاریک که نمونه های مورد بررسی رنگ نشده اند، به کارگیری یک فیلتر سبز رنگ موجب سهولت مشاهده می شود.با استفاده از فیلترهای پلاریزان در زیر لام و بر روی عدسی چشمی می توان نور را پلاریزه به دست آورد که در مطالعه دانه های نشاسته و مواد بلوری در سلولهای جانوری و گیاهی، کوتیکولهای گیاهی ، مو و پشم و سایر فیبر های طبیعی ، دندان و استخوان بدون کلسیم شده و فیبرهای عضلانی کاربرد بسیار دارد.

دیافراگم:

برای دیدن ادامه روی ادامه مطلب در زیر کلیک کنید

محيط هاي کشت را  از نظر قوام به سه گروه تقسيم مي کنيم:

اولين گروه مايع هستند که براث ناميده مي شوند مانند نوترين براث- مولر هينتون براث

در اين نوع محيط هاي کشت که به صورت سوسپانسيون هستند حرکت ديده نمي شود. 

دومين گروه جامد هستند که آگار ناميده مي شوند مانند نوترين آگار- مولر هينتون آگار

سومين گروه محيط کشت هاي نيمه جامد هستند که مقدار آگار آن ها نسبت به محيط جامد کمتر است    تا5% آگار دارند). 

اين نوع محيط هاي کشت زماني استفاده مي شوند که بخواهيم حرکت باکتري ها را مشاهده کنيم. 

انواع محيط هاي کشت:  

ساده :دراين محيط ها باکتري هايي رشد مي کنند که نياز غذايي حداقل دارند .مثلاً در نوترين، استاف رشد مي کند.

غني شده: باکتري هايي رشد مي کنند که نيازبه  غذاهاي مقوي تر دارند. براي غني کردن روي محيط پايه، مواد غذايي ديگري اضافه مي کنيم .مثل محيط کشت بلاد آگار(خون افزوده مي شود)

اختصاصي : در اين نوع از محيط هاي کشت موادي (مثلا آنتي بيوتيک خاص، رنگ ، املاح صفراوي و...) وجود دارد تا مانع رشد برخي از باکتري ها شود وآن را براي رشد گروه خاصي از باکتري ها مختص نمايد. به طور مثال: 

استرپ مي تواند در محيط کشت بلاد آگار که با کريستال ويوله اختصاصي شده رشد کندولي استاف نمي تواند رشد نمايد.

اشرشيا کلاي چون گرم منفي است مي توان در محيط کشت    EMB(ائوزين متيلن بلو) آن را از بقيه گروه هاي باکتري ها جدا کرد ، چون مي تواند در EMB رشد کند.

افتراقي: باکتري هايي که در اين محيط کشت رشد مي کنند را مي توان از نظر برخي مشخصات از هم تفکيک نمود. 

مثلاً EMB در عين حال که محيط کشت اختصاصي جهت باکتري هاي گرم منفي است محيط کشت افتراقي نيزمي باشد.در  اين محيط باکتري هاي گرم منفي لاکتوز مثبت مانند اشرشيا کلاي، کلني رنگي و باکتري هاي گرم منفي لاکتوز منفي ، کلني شفاف ايجاد مي کنند.

انواع ديگري ازمحيط هاي کشت نيز وجود دارد مانند: محيط کشت غني کننده ، محيط کشت ترانسپورت و...

آماده سازي  واستريل کردن محيط هاي کشت ميکروبي

معمولاً مواد محيط هاي کشت مختلف به صورت پودر هاي آماده در ظروفي به طور تجاري تهيه شده اند وقابل خريداري ودر دسترس مي باشند. فرمولاسيون ونحوه آماده سازي هر محيط کشت  بر روي برچسب ظروف مربوطه نوشته شده است.

در اين جا به عنوان نمونه، به نحوه آماده سازي محيط کشت نوترين آگار مي پردازيم.

* نحوه آماده سازي محيط کشت N. A (نوترين آگار):

8/2گرم ماده نوترين آگار را در 100سي سي آب مقطر حل کرده ودر ارلن استريل مي ريزيم. معمولاً حجم ارلن بايد دوبرابر حجم محلول محيط کشت باشد که در زمان حرارت وبه جوش آمدن، سرريز نگردد. آگار در 94 درجه سانتي گراد حل مي شود، پس براي انحلال کامل آن بايد محلول را تا حد جوشيدن حرارت دهيم. بهترين روش براي جلوگيري از ته گرفتن محيط کشت وانحلال بهينه، قرار دادن آن در بن ماري جوش است. حرارت دادن بايد تا شفاف شدن کامل محلول ادامه يابد. پس از آن درب ارلن رابا فويل آلومينيومي يا پنبه يا گاز استريل مسدود مي نماييم وجهت استريل کردن کامل، ارلن را در اتوکلاو قرار مي دهيم.

(اگر محيط کشت براث (مايع) بود بايستي محلول را مستقيماً در لوله آزمايش ريخته، درب آنها را با پنبه استريل مسدود ودر اتوکلاو قرار دهيم.)

ارلن محتوي محيط کشت شفاف شده رادر اتوکلاو در دماي 121 درجه درفشار15پوند(2اتمسفر) به مدت15 الي 20 دقيقه قرارداده وقتي دما به50 درجه رسيد آن را از اتوکلاوخارج مي نماييم در کنار شعله به پليت هاي استريل انتقال مي دهيم به طوري که حدوددوسوم حجم پليت را پرکند وبلافاصله درب پليت ها را مي بنديم.پس از جامد شدن محيط کشت که چند دقيقه اي طول مي کشد ، محيط مذکور جهت انتقال ميکروب ها وکشت آنها آماده است.

*اجراي تکنيک رنگ آميزي گرم 

براي انجام اين بخش از فعاليت ها از دونمونه کشت يافته اشرشيا کلاي (نمونه اي از باکتري هاي گرم منفي ) واستافيلوکوکوس اورئوس (نمونه اي از باکتري هاي گرم مثبت ) استفاده شد. 

مراحل کار به ترتيب:

1- استريل کردن لوپ روي شعله2- برداشتن نمونه با لوپ3- گسترش روي يک لام تميز 4- فيکس کردن کنار شعله 5- افزودن کريستال ويوله به مدت يک دقيقه 6- شستشو با آب مقطر 7- افزودن لوگول به مدت يک دقيقه

8- شستشو با آب مقطر 9- افزودن الکل استن به مدت 10-15 ثانيه 10- شستشو با آب مقطر 11- افزودن سافرانين (يا فوشين) به مدت 30-45 ثانيه 12- شستشو با آب مقطر، خشک کردن ومشاهده در زير ميکروسکوپ(پس از رنگ آميزي گرم باکتري هاي گرم مثبت به رنگ بنفش يا آبي و باکتري هاي گرم منفي به رنگ قرمز يا صورتي مشاهده مي شوند.)

HIV چيست ؟ 

 HIV مخفف ""Human Immunodeficiency Virus  به معني "ويروس نقص ايمني انسان" مي‌باشد.  ويروس ، يك ذره زنده خيلي كوچك است كه مي‌تواند تكثير و پخش شود اما براي زندگي نياز به موجود زندة ديگري دارد. وقتي ويروس، سلولي را آلوده كند شروع به تكثير در داخل آن سلول مي‌كند كه در نهايت منجر به آسيب آن سلول مي‌شود.  

انسان مي‌تواند توسط فرد ديگري كه به HIV مبتلا است آلوده شود و او نيز مي‌تواند بقيه افراد را آلوده كند و بر اين اساس HIV منتشر مي‌شود.

به فردي كه به HIV آلوده است HIV   +HIV مثبت  اطلاق مي‌شود.

(سيستم ايمني، گروهي ازسلولها و ارگانها هستند كه بدن را در برابر ويروسها و عفونتها محفاظت مي‌كنند.)

چرا HIV خطرناك است ؟

اگر سيستم ايمني بدن به ويروسها حمله مي‌كند و آنها را مي‌كشد پس مشكل چيست ؟

ويروسهاي مختلف به سلولها و بافتهای مختلفي از بدن حمله مي‌كنند. برخي ويروسها به پوست، برخي به دستگاه تنفسی و … حمله مي‌كنند. چيزي كه HIV را اين چنين خطرناك كرده اين است كه HIV به خود سيستم ايمني حمله مي‌كند. سيستم ايمني، گروهي ازسلولها هستند كه بدن را در برابر انواع عفونتها محفاظت مي‌كند و بدون آنها٬ توانايي بدن براي مبارزه با نواع عفونتها تضعيف مي‌شود. لذا وقتی ويروس HIV وارد بدن فردی شود به تدريج قدرت دفاعی بدن وی ضعيف می شود و اين فرد در برابر انواع بيماريها و عفونتها حتی آنهايی که در حالت عادی بيماريزا نيستند آسيب پذير میگردد.

اين روند قابل رؤيت نيست و راهي وجود ندارد تا با نگاه كردن به افراد بگوئيم كه آيا به HIV مبتلا هستند يا خير٬  ولي آزمايش خون مي‌تواند پس از چند ماه از اولين تماس، ويروس را در خون آشكار كند.

افراد آلوده به HIV ممكن است سالها كاملاً سالم بمانند و حتي خودشان ندانند كه آلوده هستند.

ايدز چيست ؟

 ايدز (AIDS) مخفف Acquired Immune Deficiency Syndrome به معني سندرم نقص ايمني اكتسابي مي‌باشد.

وقتی سيستم ايمني آسيب ببيند، نه تنها در برابر ويروس HIV (كه در آغاز به آن صدمه زده) بلكه به نسبت به بقيه عفونتها هم آسيب پذير مي‌شود و ديگر قادر به كشتن ميکربها و ويروسهايي كه قبلاً برايش مشكلي ايجاد نمي‌كردند نيست و لذا با گذشت زمان، افراد آلوده به HIV بيشتر و بيشتر بيمار مي‌شوند و معمولاً سالها پس از آلودگي به يكي از بيماريهاي خاص٬ شديداً مبتلا مي‌شوند و در اين زمان گفته مي‌شود كه آنها به ايدز مبتلا شده‌اند. بنابراين  زماني كه فرد آلوده به ويروس HIV براي اولين بار به يك بيماري جدي مبتلا شود و يا وقتي كه تعداد سلولهاي ايمني باقيمانده در بدن او از حد معيني كمتر شود، مبتلا به بيماری ايدز در نظر گرفته می شود.

  ايدز يك مرحله كاملاً جدي است كه بدن، دفاع بسيار كمي در برابر انواع عفونتها دارد. در واقع هر فرد آلوده به ويروس HIV ، الزاما مبتلا به ايدز نمی باشد اما در طول مدت آلودگی خود، می تواند ديگران را آلوده کند.

 چه مدت طول مي‌كشد تا HIV به ايدز تبديل شود؟

برای مشاهده ادامه روی ادامه مطلب در زیر کلیک کنید

الف – معرفی انواع محیط های کشت میکروبی وطرز تهیه آن ها

ب- آماده سازی  واستریل کردن محیط های کشت میکروبی 

ج- باز آموزی واجرای تکنیک رنگ آمیزی گرم 

معرفی انواع محیط های کشت میکروبی وطرز تهیه آن ها

محيط هاي كشت را  از نظر قوام به سه گروه تقسيم مي كنيم:

¨      اولين گروه مايع هستند كه براث ناميده مي شوند مانند نوترين براث- مولر هينتون براث 

در اين نوع محيط هاي كشت كه به صورت سوسپانسيون هستند حركت ديده نمي شود.

¨      دومين گروه جامد هستند كه آگار ناميده مي شوند مانند نوترين آگار- مولر هينتون آگار

¨      سومين گروه محيط كشت هاي نيمه جامد هستند که مقدار آگار آن ها نسبت به محيط جامد كمتر است (1 تا5% آگار دارند).

اين نوع محيط هاي كشت زماني استفاده مي شوند كه بخواهيم حركت باكتري ها را مشاهده كنيم.

انواع محيط هاي كشت:

• ساده :دراين محيط ها باكتري هايي رشد مي كنند كه نياز غذايي حداقل دارند .مثلاً در نوترين، استاف رشد مي كند.
• غني شده: باكتري هايي رشد مي كنند كه نيازبه  غذاهاي مقوي تر دارند. براي غني كردن روي محيط پايه، مواد غذايي ديگري اضافه مي كنيم .مثل محيط كشت بلاد آگار(خون افزوده مي شود)
• اختصاصي : در اين نوع از محيط هاي كشت موادي (مثلا آنتي بيوتيك خاص، رنگ ، املاح صفراوي و...) وجود دارد تا مانع رشد برخي از باكتري ها شود وآن را براي رشد گروه خاصي از باكتري ها مختص نمايد. به طور مثال:

 استرپ مي تواند در محيط كشت بلاد آگار كه با كريستال ويوله اختصاصي شده رشد كندولي استاف نمي تواند رشد نمايد.

 اشرشيا كلاي چون گرم منفي است مي توان در محيط كشت    EMB(ائوزين متيلن بلو) آن را از بقيه گروه هاي باكتري ها جدا كرد ، چون مي تواند در EMB رشد كند.

• افتراقي: باكتري هايي كه در اين محيط كشت رشد مي كنند را مي توان از نظر برخي مشخصات از هم تفكيك نمود.

 مثلاً EMB در عين حال كه محيط كشت  اختصاصي جهت باكتري هاي گرم منفي است محيط كشت افتراقي نيزمي باشد.در  اين محيط باكتري هاي گرم منفي لاكتوز مثبت مانند اشرشيا كلاي، كلني رنگي و باكتري هاي گرم منفي لاكتوز منفي ، كلني شفاف ايجاد مي كنند.

• انواع ديگري ازمحيط هاي كشت نيز وجود دارد مانند: محيط كشت غني كننده ، محيط كشت ترانسپورت و...

آماده سازی  واستریل کردن محیط های کشت میکروبی

    معمولاً مواد محيط هاي كشت مختلف به صورت پودر هاي آماده در ظروفي به طور تجاري تهيه شده اند وقابل خريداري ودر دسترس مي باشند. فرمولاسيون ونحوه آماده سازي هر محيط كشت  بر روي برچسب ظروف مربوطه نوشته شده است.

در اين جا به عنوان نمونه، به نحوه آماده سازي محيط كشت نوترين آگار مي پردازيم.

 * نحوه آماده سازي محيط كشت N. A (نوترين آگار):

8/2گرم ماده نوترين آگار را در 100سي سي آب مقطر حل كرده ودر ارلن استريل مي ريزيم. معمولاً حجم ارلن بايد دوبرابر حجم محلول محيط كشت باشد كه در زمان حرارت وبه جوش آمدن، سرريز نگردد. آگار در 94 درجه سانتي گراد            حل مي شود، پس براي انحلال كامل آن بايد محلول را تا حد جوشيدن حرارت دهيم. بهترين روش براي جلوگيري از ته گرفتن محيط كشت وانحلال بهينه، قرار دادن آن در بن ماري جوش است. حرارت دادن بايد تا شفاف شدن كامل محلول ادامه يابد. پس از آن درب ارلن رابا فويل آلومينيومي يا پنبه يا گاز استريل مسدود مي نماييم وجهت استريل كردن كامل، ارلن را در اتوكلاو قرار مي دهيم.

(اگر محيط كشت براث (مايع) بود بايستي محلول را مستقيماً در لوله آزمايش ريخته، درب آنها را با پنبه استريل مسدود ودر اتوكلاو قرار دهيم.)

ارلن محتوي محيط كشت شفاف شده رادر اتوكلاو در دماي 121 درجه درفشار15پوند(2اتمسفر) به مدت15 الي 20 دقيقه قرارداده وقتي دما به50 درجه رسيد آن را از اتوكلاوخارج می نماییم در كنار شعله به پليت هاي استريل انتقال مي دهيم        به طوري كه حدوددوسوم حجم پليت را پركند وبلافاصله درب پليت ها را مي بنديم.پس از جامد شدن محيط كشت كه چند دقيقه اي طول مي كشد ، محيط مذكور جهت انتقال ميكروب ها وكشت آنها آماده است.

*اجرای تکنیک رنگ آمیزی گرم

براي انجام اين بخش از فعاليت ها از دونمونه كشت يافته اشرشيا كلاي (نمونه اي از باكتري هاي گرم منفي ) واستافيلوكوكوس اورئوس (نمونه اي از باكتري هاي گرم مثبت ) استفاده شد.

مراحل كار به ترتيب:

1- استريل كردن لوپ روي شعله  2- برداشتن نمونه با لوپ  3- گسترش روي يك لام تميز 4- فيكس كردن كنار شعله

5- افزودن كريستال ويوله به مدت يك دقيقه      6- شستشو با آب مقطر   7- افزودن لوگول به مدت يك دقيقه

8- شستشو با آب مقطر   9- افزودن الكل استن به مدت 10-15 ثانيه  10- شستشو با آب مقطر  11- افزودن سافرانين (يا فوشين) به مدت 30-45 ثانيه  12- شستشو با آب مقطر، خشك كردن ومشاهده در زير ميكروسكوپ(پس از رنگ آميزي گرم باكتري هاي گرم مثبت به رنگ بنفش يا آبي و باكتري هاي گرم منفي به رنگ قرمز يا صورتي مشاهده مي شوند.)

مقاله ای در مورد

Flexible Bachelor: a new curriculum in Groningen

به زبان انگلیسی و فرمت power point

برای دانلود اینجا کلیک کنید